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首頁 > 產(chǎn)品中心 > 試劑盒 > 基因編輯 > MJ5460\MJ5461Inspire Spark©PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒

Inspire Spark©PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒

簡要描述:產(chǎn)品名稱:Inspire Spark©PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒
產(chǎn)品貨號:MJ5460 ( 50 rxn)、MJ5461 (20 rxn)、MJ5462(6 rxn)

  • 產(chǎn)品型號:MJ5460\MJ5461
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2025-07-25
  • 訪  問  量:329
詳細介紹
品牌紅榮微再貨號MJ5460MJ5461
供貨周期現(xiàn)貨應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合

產(chǎn)品名稱:Inspire Spark©PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒

產(chǎn)品貨號:MJ5460 ( 50 rxn)、MJ5461 20 rxn)、MJ5462(6 rxn)



產(chǎn)品簡介

InspireSpark©PrimeRNP Kit試劑盒(貨號:MJ5460)是一款基于自遞送 CRISPR/SpCas9系統(tǒng)的基因編輯工具,專為基因敲除(KO)和基因敲入(KI)實驗優(yōu)化設(shè)計。通過創(chuàng)新的遞送機制,無需依賴電轉(zhuǎn)儀等復(fù)雜設(shè)備即可在原代細胞及各類細胞系中實現(xiàn)高效編輯,經(jīng)嚴格驗證,基因敲除、基因敲入效率達 85-90%,同時保持極低脫靶率及無細胞毒性特性,為研究者提供安全可靠的實驗解決方案。



儲存條件與有效期
短期儲存:解凍后保存于-20℃冰箱,避免反復(fù)凍融。
長期儲存:未開封試劑盒保存于-80℃冰箱。開封后如長期不使用保存于-80℃冰箱 。

有效期:18個月



實驗步驟

以人原代T細胞(1x106個細胞)為例.

一. 轉(zhuǎn)導復(fù)合物制備

1.取1.5μL SgRNA(100μM)與1.5μL Solution I 于1.5mL(DNase-Free、RNase-Free)離心管中混合,37℃孵育5-10分鐘,形成RNP復(fù)合物。

注: 先加SgRNA再加Solution I
2. 加入50μL預(yù)平衡至室溫的Solution II(使用前渦旋混勻),充分混勻后室溫靜置5分鐘
二. 細胞轉(zhuǎn)導
1. 預(yù)處理細胞:激活1x106個T細胞48小時后,以300xg離心洗滌并轉(zhuǎn)移至新培養(yǎng)板,次日進行編輯操作。
2. 離心收集細胞,徹·底移除培養(yǎng)基(建議使用OptiMEM或PBS清洗殘留)。
3. 將細胞沉淀重懸于制備好的轉(zhuǎn)導復(fù)合物溶液中,輕柔混勻后,37℃孵育45分鐘。
三. 細胞培養(yǎng)與效率檢測
1. 向轉(zhuǎn)導后的細胞混合液中加入600μL含10% FBS及200U IL-2的T細胞培養(yǎng)基,重懸后接
種至24孔板,維持細胞密度為2-3×10?/mL。
2. 37℃培養(yǎng)4-5天后,檢測基因編輯效率。



注意事項與擴展應(yīng)用
1. AAV輔助敲入(KI):若需聯(lián)合 AAV(MOI: 2×10?-5×10?)進行KI,按以下操作:
AAV體積 ≤ 5μL時:于步驟一(RNP制備階段)加入。
AAV體積>5μL時:于步驟三(細胞培養(yǎng)階段)加入。
2. 慢病毒輔助實驗:激活24小時后感染,72小時進行編輯轉(zhuǎn)導。
3. 多基因編輯:
- 方案A:步驟一中混合多靶點RNP復(fù)合物。
- 方案B:在不同時間點分步轉(zhuǎn)導不同RNP復(fù)合物。
4. 細胞狀態(tài)要求:轉(zhuǎn)導前需確保細胞活性>90%,編輯效率與細胞狀態(tài)直接相關(guān)。
5. 電轉(zhuǎn)兼容性:Solution I 中的eSpCas9蛋白可單獨用于電轉(zhuǎn),效率較野生型提升30%。
貼壁細胞需消化離心后按上述步驟操作。
6. 本實驗需使用DNase-Free、RNase-Free耗材。


產(chǎn)品名稱:Inspire Spark©PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒

產(chǎn)品貨號:MJ5460 ( 50 rxn)、MJ5461 20 rxn)、MJ5462(6 rxn)


常見問題:

InspireSpark® PrimeRNP Kit Q&A
Q:T細胞激活48小時后離心清洗的清洗液及鋪板培養(yǎng)基要求?
A:清洗液為實驗原用的T細胞培養(yǎng)基。操作流程:輕柔吹吸重懸細胞 → 離心(400 ×g, 5
min)→ 徹·底棄上清 → 用新鮮配制的同款T細胞培養(yǎng)基重懸細胞。目的:防止T細胞過度激
活、去除碎片、優(yōu)化細胞狀態(tài)。
Q:實驗步驟中FBS能否替換為其他添加劑?
A:可使用人AB血清或無血清培養(yǎng)基(注:無血清條件下細胞生長狀態(tài)可能減弱)。
Q:轉(zhuǎn)導培養(yǎng)基含IL-2或血清替代物是否影響轉(zhuǎn)導?
A:無影響。通過離心清洗徹·底棄除上清(避免血清蛋白干擾),最終使用轉(zhuǎn)導復(fù)合物重懸
細胞沉淀即可。
Q:同時編輯兩個基因是否需要配置兩份混合液?能否同時加入細胞?
A:僅需將RNP1與RNP2加入同一份Solution II中孵育,無需分裝多份Solution II。混合后的
復(fù)合物可同時加入細胞。
Q:敲除(KO)和敲入(KI)能否同時實現(xiàn)?最多支持幾個基因編輯?
A:支持同步操作。多基因編輯需在制備轉(zhuǎn)導復(fù)合物時進行多RNP制備,或分次轉(zhuǎn)導(建議
首·次轉(zhuǎn)導≤2個基因,間隔48小時后再轉(zhuǎn)導≤2個基因)。
Q:Solution II能否搭配其他廠家的Cas9蛋白?是否支持電轉(zhuǎn)
A:可以使用,但未經(jīng)大量數(shù)據(jù)驗證,無法保證其編輯效率。

Inspire Spark?PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒


紅榮微再 基因編輯:精準基因編輯方案,突破電轉(zhuǎn)瓶頸 · 原代細胞高效編輯 · 85-90% KO/KI效率



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